金年会金字招牌诚信至上为您提供人结肠腺癌细胞LS1034的详尽培养说明，确保您的实验顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基+10% FBS+1% P/S
传代方法：首次建议1:2传代
传代情况：每2天换液
备注：用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如效果不佳，建议直接选用金年会金字招牌诚信至上的完全培养基。

二、细胞处理及培养

收到细胞后，待其恢复至良好状态，再注入完全培养液并封闭瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，不提供照片默认状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

1. 若细胞汇合度未超过80%，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中继续培养；
2. 若细胞密度超80%，则可进行传代。步骤如下：
   1) 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
   2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞情况。若细胞变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，加入5ml培养基终止消化。
   3) 吸出液体，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
   4) 按1:2比例分瓶，补充新的培养基至每瓶5-8ml，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置观察，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打后移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟；
3. 弃上清后加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞立即放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，须在-80℃存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶后，擦拭管壁；
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中；
4. 第二天更换新鲜培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。如脱离较多，可将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，沉淀后加入胰酶消化，轻轻重悬消化后再进行分瓶传代，补充新培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题，重发情况及判定标准：
   1) 运输过程中细胞丢失、瓶身破损等重发；
   2) 细胞污染需在收到后48小时内反馈实验结果，核实后重发；
   3) 常温发货细胞静置24小时后大多数未存活，需提供细胞状态照片，重发；
   4) 干冰发货细胞复苏后24小时未存活或出现污染，重发；
   5) 活性问题需在7天内反馈，用台盼蓝染色法验证，核实后重发；
   6) 收到当天及第2、3天请拍照，超期未反馈视为合格。
   7) 具体情况视而定。

2. 不予重发情况：
   1) 细胞污染由客户造成，不重发；
   2) 不当操作导致细胞状态不良，不重发；
   3) 未使用推荐培养体系导致细胞状态不良，不重发；
   4) 未提供培养前3天照片，细胞状态不良，不重发；
   5) 细胞处理不当，不重发；
   6) 收到2天内未告知，不重发；
   7) 具体情况而定。

选择金年会金字招牌诚信至上，为您的实验提供优质的细胞资源与支持。